Masalah Umum dalam Kromatografi Cair (3)

2026-08-01

01 Pergeseran Garis Dasar

Pergeseran garis dasar (baseline drift) adalah masalah umum yang dihadapi oleh ahli kromatografi. Hal ini sering terjadi dalam pengujian rutin, terutama selama elusi gradien.

Secara umum, pergeseran garis dasar (baseline drift) adalah hal normal saat menyeimbangkan kolom kromatografi di awal analisis. Penyeimbangan kolom biasanya memakan waktu lebih dari 40 menit. Waktu penyeimbangan yang lebih lama diperlukan jika larutan penyangga atau garam penyangga digunakan, atau saat beroperasi pada panjang gelombang rendah (

Fluktuasi suhu kolom. Stabilkan suhu kolom kromatografi dan fase gerak. Pastikan tidak ada jendela atau AC yang meniup langsung ke oven kolom.
Bahkan variasi suhu kecil pun dapat memicu fluktuasi garis dasar. Hal ini umumnya memengaruhi detektor indeks bias, detektor konduktivitas, detektor UV sensitivitas rendah, dan detektor fotolistrik lainnya. Kendalikan suhu kolom dan fase gerak; pasang penukar panas di bagian hulu detektor.
Sel alir terkontaminasi atau terdapat gas yang terperangkap. Bilas sel alir dengan metanol atau pelarut polar kuat lainnya (lepaskan kolom kromatografi terlebih dahulu). Jika perlu, gunakan asam nitrat 1 N (jangan gunakan asam klorida).
Energi lampu tidak mencukupi. Ganti lampu dengan yang baru.
Fase gerak terkontaminasi, terdegradasi, atau fase gerak yang disiapkan dengan pelarut berkualitas rendah; pencampuran fase gerak yang tidak memadai. Verifikasi komposisi fase gerak; gunakan reagen berkualitas tinggi dan pelarut kelas HPLC.
Variasi proporsi fase gerak (tidak termasuk program gradien). Periksa katup proporsi, mixer, dan komponen lainnya untuk mengetahui adanya kelainan.
Kolom kromatografi terkontaminasi. Bilas atau ganti kolom.

02 Kebisingan Dasar

Untuk detektor UV, lampu deuterium perlu dipanaskan terlebih dahulu selama lebih dari 30 menit setelah dinyalakan untuk mencapai garis dasar yang stabil. Derau mengacu pada fluktuasi acak sinyal keluaran detektor yang tidak terkait dengan analit, diklasifikasikan menjadi derau jangka pendek dan derau jangka panjang.

Ketika lampu deuterium telah digunakan dalam waktu lama dan mendekati akhir masa pakainya (masa pakai: sekitar 2000 jam – 4000 jam), kebisingan dasar meningkat secara signifikan, dan penggantian tepat waktu diperlukan. Selain sumber cahaya, gelembung udara di jalur aliran juga dapat menghasilkan kebisingan.

Untuk membedakan apakah peningkatan kebisingan dasar berasal dari penuaan lampu atau gelembung udara di jalur aliran: hentikan pompa dan lanjutkan pemantauan garis dasar. Jika kebisingan menghilang segera dan garis dasar menjadi datar, gelembung udara dalam fase bergerak adalah penyebabnya; lakukan penghilangan gas. Jika kebisingan tetap ada setelah menghentikan pompa, kegagalan lampu harus dicurigai. Selain itu, frekuensi pengambilan sampel yang terlalu tinggi dapat menyebabkan peningkatan kebisingan dasar.

Kebisingan Garis Dasar Reguler

Penyebab kebisingan garis dasar reguler: udara yang terjebak dalam fase gerak, detektor, atau pompa; kebocoran cairan; pencampuran fase gerak yang tidak sempurna; pengaruh suhu (suhu kolom yang terlalu tinggi, detektor yang tidak dipanaskan); perangkat elektronik lain yang menggunakan sirkuit daya yang sama; pulsasi pompa.

Tindakan pencegahan untuk kebisingan dasar: hilangkan gas dari fase gerak sebelum injeksi sampel; bilas sistem untuk menghilangkan udara dari detektor atau pompa; periksa sambungan selang yang longgar, kebocoran pompa, pengendapan garam, dan kebisingan abnormal; ganti segel pompa jika diperlukan. Homogenkan pelarut dengan mengocok secara manual, atau gunakan pelarut dengan viskositas rendah untuk mengurangi perbedaan, atau pasang penukar panas. Putuskan sambungan sistem LC, detektor, dan perekam jika peralatan elektronik lain terhubung, identifikasi gangguan eksternal dan perbaiki. Pasang peredam pulsa untuk menekan pulsasi pompa.

Kebisingan Garis Dasar Tidak Teratur

Kebocoran cairan: Periksa sambungan yang longgar, kebocoran pompa, pengendapan garam, dan suara abnormal. Ganti segel jika diperlukan; periksa sel aliran untuk kebocoran.
Fase gerak yang terkontaminasi, terdegradasi, atau fase gerak yang disiapkan dengan pelarut berkualitas rendah: Verifikasi komposisi fase gerak.
Pelarut fase gerak yang tidak bercampur: Pilih komponen fase gerak yang saling bercampur.
Komponen elektronik yang tidak berfungsi pada detektor/perekam: Matikan detektor dan perekam untuk pemeriksaan dan pemecahan masalah.
Gelembung udara di dalam sistem: Bilas sistem dengan pelarut polar yang kuat. Jika terdapat gelembung di detektor, bersihkan detektor dan pasang regulator tekanan balik di hilir detektor.
Sel alir yang terkontaminasi (kontaminan dalam jumlah kecil dapat menimbulkan kebisingan): Bersihkan sel alir dengan asam nitrat.
Energi lampu detektor tidak mencukupi: Ganti lampu.
Kehilangan isian atau penyumbatan kolom kromatografi: Ganti kolom.
Pencampuran fase gerak yang tidak memadai atau mixer yang rusak: Perbaiki atau ganti mixer. Tidak disarankan menggunakan alat pencampur pompa untuk metode isokratik.